瓊脂糖微球-重組耐堿蛋白A親和填料的產(chǎn)品特點(diǎn)
1 、產(chǎn)品介紹
NuPerley rat-PA是一款抗體親和填料，其配基rat-PA為重組耐堿蛋白A（Recombinant Alkali-tolerant Protein A，rat-PA），NuPerley基球是新一代高剛性瓊脂糖微球。
重組耐堿蛋白A配基由大腸桿菌表達(dá)，不含動(dòng)物來源，該配基通過多點(diǎn)偶聯(lián)的方式與基球偶聯(lián)，減少了配基掉落，通常情況下相對(duì)于抗體的配基掉落量可控制在5~10ppm以內(nèi)。加之基因工程改造，其對(duì)人IgG的動(dòng)態(tài)結(jié)合載量穩(wěn)定在45mg/mL，可耐受0.1~0.5M濃度的NaOH溶液清洗和去除熱源。相較于ProANUPharoseFF，本產(chǎn)品保持了對(duì)人、小鼠、大鼠、兔、牛等等來源的多種類型和亞型的抗體有親和作用，可從腹水、血清、細(xì)胞培養(yǎng)上清或細(xì)胞抽提物中分離和純化多種哺乳動(dòng)物不同亞型的抗體或包含抗體Fc片段的基因工程重組蛋白，可滿足不同規(guī)模的研究或生產(chǎn)嚴(yán)格的清潔要求。
2 、產(chǎn)品特點(diǎn)與技術(shù)指標(biāo)
產(chǎn)品名稱 瓊脂糖微球-重組耐堿蛋白A親和填料
基質(zhì) 高剛性瓊脂糖微球
配基 重組耐堿蛋白A ， ≥10mg/mL
粒徑范圍 a 30~100 μm
平均粒徑 ~60 μm
動(dòng)態(tài)結(jié)合載量 b ≥45 mg h-IgG/mL
推薦工作流速 c 60~300 cm/h
最大流速與壓力 d >1500 cm/h
使用 pH 3~10（推薦的工作 pH），3~12（短期穩(wěn)定）
化學(xué)穩(wěn)定性 在以下溶液中穩(wěn)定：常用的水相緩沖液、0.1~0.5 mol/L 氫氧 化鈉、6 mol/L 鹽酸胍、70%乙醇等。
儲(chǔ)存與運(yùn)輸 20%乙醇，2~8 ℃保存，2~30 ℃運(yùn)輸
注：a90%體積以上的微球在此粒徑范圍；bDBC10%測(cè)試條件為：10%流穿，6 min 停留時(shí)間；c 推 薦流速是指該流速可滿足大部分柱高下 2~6 min 停留時(shí)間的使用條件，并非只能在該流速范圍 內(nèi)工作；d 10 cm 柱高下的最大測(cè)試流速。
使用方法參考
3.1 色譜柱裝填
以下闡述與層析系統(tǒng)連接時(shí)，填料的色譜柱裝填方法。
（1）所有需要用到的材料的溫度要與色譜操作的溫度一樣，液體最好做脫氣處理。
（2）填料用量計(jì)算：通過沉降定量填料體積，需要的沉降填料體積=柱體積×壓縮比（也稱壓縮因子）。沉降體積是指填料在20%乙醇保存液中自然沉降完全讀取的穩(wěn)定體積。NuPerley rat-PA的壓縮比為1.10。為使達(dá)到裝柱比，可通過柱頭下壓的方法，也可以通過高流速壓柱。
（3）填料清洗：將填料懸液充分搖勻后量取相應(yīng)體積，抽濾除去液體，并用約3倍填料體積的純化水洗滌，重復(fù)3次，以除去保存液。
（4）裝柱填料懸液準(zhǔn)備：將填料轉(zhuǎn)移到適當(dāng)?shù)娜萜髦校尤脒m量的裝柱液，制成50~75 v%的裝柱填料懸液，使用前攪勻。
（5）裝填前準(zhǔn)備：在清洗干凈的層析柱下端加入裝柱液，以除去下墊片及層析柱下端的空氣，在柱內(nèi)保留少量的蒸餾水，擰緊下堵頭，調(diào)整柱子使其垂直于地面。
（6）裝填：將攪勻后的填料懸液一次性緩慢倒入層析柱內(nèi)（必要時(shí)使用裝柱器），為避免引入氣泡，應(yīng)使之沿層析柱內(nèi)壁自然流下。將所有填料加入后，用裝柱液將裝柱器加滿，擰緊裝柱器上蓋，將柱子與層析系統(tǒng)連接。
（7）壓柱：使柱內(nèi)填料自然沉降（或 50~150 cm/h 的低流速下沉降），待填料沉降完全后（填料與液體的界面清晰），去除裝柱器，裝上上柱頭，并將柱頭下降至界面處；通過高流速（推薦流速見下表，注意柱壓不超過0.3MPa），繼續(xù)壓柱至界面清晰穩(wěn)定，標(biāo)記界面穩(wěn)定時(shí)的柱高。停泵，打開柱頭上的閥門/堵頭，關(guān)閉柱底的閥門/堵頭，下壓柱頭至標(biāo)記位置下方與壓縮比對(duì)應(yīng)的位置，旋緊柱頭，裝柱完成。裝柱完成后，需用高流速平衡柱內(nèi)的填料。
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